多克隆抗体制备服务

由多种抗原决定簇刺激机体，相应地就产生各种各样的单克隆抗体，这些单克隆抗体混杂在一起就是多克隆抗体，机体内所产生的抗体就是多克隆抗体。

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P550D0CEC20E75-0

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所属分类：抗体制备

【实验原理】 当将抗原注射入实验动物体内时，一系列抗体生成细胞会不同程度的与抗原结合，受抗原刺激后在血液中产生不同类型的抗体，这种由一种抗原刺激产生的抗体称为多克隆抗体。多克隆抗体中不同的抗体分子可以以不同的亲和能力与抗原分子表面不同的部分—抗原决定簇相结合。 将抗原导入敏感动物体内后，可刺激网状内皮细胞系统，尤其是淋巴结和脾脏中的淋巴细胞大量增殖。如图所示，实验动物对初次免疫和二次免疫的应答有明显的不同。通常初次免疫应答往往比较弱，尤其是针对于易代谢，可溶性的抗原。首次注射后大约7天，在血清中可以观察到抗体但抗体的浓度维持在一个较低的水平，在大约10天左右抗体的滴度会达到最大值。但同种抗原注射而产生的二次免疫应答的结果明显不同，和初次免疫应答相比抗体的合成速度明显增加并且保留时间也长。 免疫应答的动力学结果取决于抗原和免疫动物的种类，但初次和二次免疫应答之间的关系是免疫应答的一个重要特点。三次或以后的抗原注射所产生的应答和二次应答结果相似：抗体的滴度明显增加并且血清中抗体的种类和性质发生了改变，这种改变被称为免疫应答的成熟，具有重要的实际意义。通常在抗原注射4-6周后会产生具有高亲和力的抗体。
【实验材料】 ⒈ 实验动物 成年兔。 ⒉ 实验器材 特制兔盒；刀片；25G针头；1ml注射器；20 
ml 血液收集管；药铲；离心机以及塑料离心管；加样器及加样管；烧杯。
⒊ 实验试剂 ⑴ 
抗原；乙醇；20mM 磷酸缓冲溶液pH7.2。 ⑵ 
福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂： 
福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂的成分 
 
<table style="background-color: rgb(238, 238, 238); border-spacing: 0px; width: 571px; border-collapse: collapse; font-size: 14px; line-height: 21px; font-family: tahoma, arial, 宋体, sans-serif; color: rgb(68, 68, 68);" width="571" border="1" cellpadding="0" cellspacing="0">
<tbody>
<tr>
<td style="PADDING-BOTTOM: 0px; MARGIN: 0px; PADDING-LEFT: 0px; WIDTH: 571px; PADDING-RIGHT: 0px; WORD-WRAP: break-word; PADDING-TOP: 0px">成分 
 完全佐剂 不完全佐剂</td></tr>
<tr>
<td style="PADDING-BOTTOM: 0px; MARGIN: 0px; PADDING-LEFT: 0px; WIDTH: 571px; PADDING-RIGHT: 0px; WORD-WRAP: break-word; PADDING-TOP: 0px"> 
石蜡油 6 份 + +</td></tr>
<tr>
<td style="PADDING-BOTTOM: 0px; MARGIN: 0px; PADDING-LEFT: 0px; WIDTH: 571px; PADDING-RIGHT: 0px; WORD-WRAP: break-word; PADDING-TOP: 0px">无水羊毛脂 
4 份 + +</td></tr>
<tr>
<td style="PADDING-BOTTOM: 0px; MARGIN: 0px; PADDING-LEFT: 0px; WIDTH: 571px; PADDING-RIGHT: 0px; WORD-WRAP: break-word; PADDING-TOP: 0px">杀死的分枝杆菌 
3-5 mg + -</td></tr>
<tr>
<td style="PADDING-BOTTOM: 0px; MARGIN: 0px; PADDING-LEFT: 0px; WIDTH: 571px; PADDING-RIGHT: 0px; WORD-WRAP: break-word; PADDING-TOP: 0px">磷酸缓冲溶液 
10 份 + +</td></tr></tbody></table>
（福氏完全佐剂的制备：使用前在福氏不完全佐剂中加入适量杀死的分枝杆菌）
【实验方法】 ⒈ 抗原的制备 抗原制备的主要目的在于在免疫动物体内产生最强、最适当的抗体。由于纯化的抗原适合产生抗体，因此在注射前通常采用一些经典的方法，比如柱层析、分级萃取、亚细胞分离等进行抗原的分离和纯化。如果多肽抗原在SDS/PAGE中为可见的单一带，抗原从凝胶中的抽提可作为纯化的最后一个步骤。 ⒉ 预放血 轻轻的将兔子放在特制兔盒中，处于放松状态的兔子采血会较容易。按压兔子耳根部直至血管突出,然后将针头插入耳部血管的中上部，观察到进针后小心推出活塞收集血液1ml 
-5ml。结束收集后，退出针头并按压伤处以制止血流，再用乙醇消毒。取收集的血液在37°C恒温箱中放置30分钟以防止激活补体系统，再将试管在4°C放置过夜使血液凝固。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液在4°C保存。 ⒊ 注射抗原 ⑴ 
准备两只成年兔，将100µg抗原/兔溶入1ml磷酸缓冲溶液中待用。在1ml福氏不完全佐剂中加入分枝杆菌制成完全佐剂，并加入1ml抗原溶液，剧烈震荡使之充分乳化，用3ml注射器抽取该乳化液，接上25G针头，排除注射器中的气泡。从笼中取出兔子放在平坦处，在4个不同的部位进行皮下注射，两处在后背，两处在大腿处。抚去注射处的兔毛并用乙醇消毒暴露的皮肤。捏出皮肤，将针头以相对皮肤15度的角度进针，进针深度为1cm-2cm，小心不要刺入肌肉中，在4个不同部位分别各注射约500µl抗原溶液。注射结束后，将针在注射处放置几秒钟后再轻轻拔出，并用乙醇在注射处消毒。在4个部位重复上述操作。用相同方法免疫另一只家兔。 ⑵ 
每4-6周注射抗原，并在注射后的7天-10天按照步骤2收集血液。将收集的血液与注射前收集的血液进行比较，检查是否有抗体产生。待确定产生抗体后可大量收集血液，但每只兔子收集血液不能多于40ml以防止休克。 ⒋ 收集血液 ⑴ 
将家兔轻轻放入固定架上,二甲苯涂于耳部血管的上中部，用刀片倾斜45°在该处切出0.23cm-0.3cm的切口使血液能自由的流出。用消毒后的管收集滴出的血液，若在结束之前出现凝固可用温水轻擦切口处，再继续收集。收集适量血液后可用消毒后的纱布轻擦患处，轻按患处10秒-20秒确定血流停止后方可结束。 ⑵ 
将血液在37°C恒温箱中放置30分钟，再在4°C放置过夜。用药铲将血凝块从管壁上拨落，将血液转移至塑料离心管中，4°C，10,000g离心10分钟，收集上清液即为抗血清，可在-20°C保存数年。 【实验结果】 利用蛋白质免疫印迹法或免疫电泳方法检查抗体产生情况。
 
我们的优势：
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--使用ABGENT专有抗原表位预测软件筛选设计多肽序列;
--优化抗原提呈的专有多肽药物化学;
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专业的抗体筛选和纯化技术：
--制备磷酸化、甲基化、乙酰化等特异性修饰的抗体;
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--高通量抗体筛选技术;
--选择低背景，高亲和力抗体纯化方案。
方便经济：技术服务实行分步报价，按节点收费，为客户节约成本。
交货快速：多抗生产周期只要2.5-4个月，常规多肽合成只需10个工作日。
 
持续不断的技术支持：从前期咨询，中间的项目跟踪，直至项目结束，我们专业的技术支持人员会全程跟进，确保整个抗体制备项目顺利完成。