DNA测序是指分析特定DNA片段的碱基序列,也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)与鸟嘌呤的(G)排列方式。
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Sanger法即双脱氧链终止法(Chain Termination Method),是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,并且在每个碱基后面进行荧光标记,产生以A、T、C、G结束的四组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测,从而获得可见的DNA碱基序列。
DNA常规测序
测序特色
1. 取样快 高效快捷的专业物流,每天两次取样,保证样品第一时间到达实验室。
2. 读长长 测序单序列读长可达800~900bp。
3. 序列准 提供的可靠碱基,质量值均在Q20以上。
4. 操作精 专业的技术人员,严格SOP双重质控,样品数据真实可靠。
5. 效率高 质粒和已纯化PCR产物,24h出结果,菌和未纯化PCR 产物,36~40h出结果。
免费服务
根据不同的需求,我们还可以为合作伙伴免费提供:
1. 测序引物设计和评估
2. 序列拼接
3. DNA序列的基本分析
4. Primer Walking引物设计
5. 菌液活化
送样要求
1. 菌样
1) 请注明载体类型和抗性,我们常备Amp,Kan两种抗生素,其他抗性请自备。
2) 若菌中包含的质粒为低拷贝,请直接提供约3μg的纯化质粒。
3) 若使用了特殊的抗生素,请提供5ml菌液或质粒。
4) 若菌液需培养,请提供至少500μl过夜培养的菌液,封口保存以防止交叉污染或渗漏。
5) 若菌液无需培养,请提供至少4ml已培养好的菌液。
6) 若有大量样品进行测序,建议在Eppendorf管中用牙签穿刺培养菌种。
7) 若样品为噬菌体,请提供质粒,我们不收取菌液。
2. 质粒(除特殊样品,我们一般不建议提供质粒)
1) 若提供质粒,请确保使用的溶剂为灭菌的双蒸水,浓度>100ng/μl,总体积>20μl。
2) 若有可能,请提供1ml左右含有相应质粒的菌液备用。
3) 请注明载体名称及插入片段的长度。
4) 若质粒较大,请注明载体长度;若质粒拷贝数低,请注明具体拷贝数。
3. PCR产物已纯化
1) 若提供已纯化的PCR产物,请确保使用的溶剂为灭菌的双蒸水,浓度>50ng/μl,总体积>20μl。
2) 请确保纯化的PCR产物电泳结果为单一的条带,否则将影响测序结果或导致测序失败。
3) 请注明测序片段长度,片段长并需测通的样品需适当增加送样体积。
4. PCR产物未纯化
1)若提供未纯化的PCR产物,请确保片段长度大于100bp,小于2Kb,浓度>50ng/μl,总体积>50μl。
2) 片段长度若大于2Kb,建议您克隆后再测序。
3) 请注明片段长度,便于核对样品测序是否成功及安排样品测通、拼接工作。
4) 建议提供电泳结果为单一明亮的特异性条带的PCR未纯化产物。
5)若要自行提供引物,请确保引物经过PAGE纯化,浓度>5pmol/μl(或5μmol/L),总体积>10μl;若提供干粉,请注明OD值。另外,请提供引物全序列(18~22bp为宜)、PCR退火温度等信息。随机引物、标记引物和简并引物不能用于测序。
6) 发送测序结果一个月后,若合作伙伴无要求返还样品或引物等,则我们将代为销毁。