基因敲除小鼠

基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。

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所属分类：动物模型构建

基因敲除(gene knock out)
基因敲除(gene knock 
out)，是指对一个序列已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将该基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。基因敲除除可中止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变。既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。
 
<center> </center>平台基因敲除技术服务特点： 
1.运用Recombineering技术以及LoxP与Frt序列的组合，实现利用一个基因打靶载体，同时完成报告基因小鼠、完全基因敲除小鼠、条件型基因敲除小鼠三种小鼠模型的构建
2 .对于重组效率特别低的位点，使用TALEN或者CRISPR/CAS9技术，增加了基因打靶载体的重组效率。
3 
.使用来源于129/Ola品系的E14Tg2a小鼠ES细胞系，确保高效率的获得生殖系掺入的嵌合小鼠，同时使用来源于C57/BL6N品系的JM8A3小鼠ES细胞系，获得小鼠后无需回交，加快对小鼠的功能分析。
4. 利用talen或CRISPR/CAS9技术，进行小鼠受精卵的显微注射，完成对小鼠基因的快速完全敲除
5. 根据研究者的需要，对基因打靶策略提供个性化的设计。
 
基因敲除技术流程图：
第一步，胚泡时期发育胚胎的分离。此胚胎来源于灰色品系的小鼠。
第二步，从灰色小鼠胚泡中分离胚胎干细胞，在体外进行培养。
第三步，用同源重组载体转染胚胎干细胞，用含有新霉素和更昔韦洛的培养基筛选发生了同源重组的细胞。
第四步，将筛选得到的胚胎干细胞植入白色小鼠的早期胚胎(胚泡时期)中。
第五步，将上述胚胎植入假孕母鼠(白色)子宫中。
第六步，在母鼠所产的小鼠中，有一些是正常的白色，另一些则是嵌合体灰白相间的小鼠。这些嵌合体小鼠的细胞一部分起源于白色皮毛的胚泡细胞，另一部分则起源于重组的胚胎干细胞。起源于重组胚胎干细胞的皮毛显示出灰色斑块，很好辨认。
第七步，嵌合体小鼠与野生型白色小鼠进行杂交，如果嵌合体小鼠的生殖细胞恰好是起源于重组胚胎干细胞，那么其子代小鼠就都应该呈现灰色。而这些灰色小鼠的所有细胞都是杂合体。
第八步，杂合体灰色小鼠(+/H)之间进行杂交，得到灰色和白色的子代。从灰色子代中筛选出纯合小鼠(H/H)，其一对同源染色体上的等位基因都失活，此纯合小鼠即为 
“基因敲除小鼠构建”。
 
技术方法：
(1)构建重组基因载体﹔
(2)用电穿孔、显微注射等方法把重组DNA转入受体细胞核内﹔
(3)用选择培养基筛选已击中的细胞﹔
(4)将击中细胞转入胚胎使其生长成为转基因动物，对转基因动物进行形态观察及分子生物学检测。
 
服务内容：
提供“转基因”、“基因打靶”小鼠制备服务。具体内容包括：基因打靶载体构建、小鼠ES细胞转染、阳性ES细胞克隆筛选、囊胚显微注射、嵌合小鼠生殖系掺入鉴定等。